2%TTC染色液檢測(cè)原理

2,3,5-氯化三苯基四氮唑，又稱四唑紅，英文名稱： 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride，簡(jiǎn)稱TTC，TTZ，或TPTZ。CAS號(hào)為298-96-4，分子式：C19H15ClN4，分子量：334.8。 TTC是一種脂溶性光敏感復(fù)合物，它是呼吸鏈中吡啶—核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體，能與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈紅色。原理是TTC本身可作為一種氧化還原指示劑，活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶（尤其是線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶）可以將TTC還原為不溶性的紅色穩(wěn)定的三苯基甲臢(1,3,5-triphenylformazan，TTF），活組織被染成不同程度的紅色。當(dāng)組織缺血、細(xì)胞死亡或無生命力時(shí)，缺血梗塞組織內(nèi)的細(xì)胞呼吸酶活性下降,則不能發(fā)生還原反應(yīng),不會(huì)產(chǎn)生成色變化、而呈蒼白色或染色淺。因此,根據(jù)染色部位和染色深淺程度可以鑒定組織或者種子的活力。常用于檢測(cè)種子的生存能力以及檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織的缺血梗塞狀況。TTC常用的染色濃度為2%（w/v），也可根據(jù)組織類型做濃度的適當(dāng)調(diào)整。

原理：

正常組織中的脫氫酶可以將TTC還原成不溶性的紅色穩(wěn)定的三苯基甲臢(TTF)，而呈紅色。如果腦組織細(xì)胞或胚種細(xì)胞死亡或生活力衰退，則不能染色或染色較淺。根據(jù)染色部位和染色深淺程度來鑒定組織缺血死亡或者種子的活力。

適用范圍：

適用于尸檢中的新鮮心、腦組織以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物早期梗死組織的染色,測(cè)定腦梗死灶體積。

染色步驟：

1.按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)自行制作組織模型，切片。

2.染色：取新鮮組織或切片完-全浸泡于TTC染液中，放入30-37℃的恒溫箱內(nèi)保溫15～30分鐘，邊孵育邊觀察顏色變化 

3.染色后用清水或PBS緩沖液輕輕清洗，觀察染色結(jié)果并拍照記錄。

4.若需長(zhǎng)久保存，用4%多聚甲-醛溶液或福爾馬林固定10～20分鐘。

染色結(jié)果：

正常組織被染成紅色，梗死區(qū)不被染色。

注意事項(xiàng)：

1.TTC染色液可重復(fù)使用2-3次，可將用過的TTC染色液放到新的容器內(nèi)繼續(xù)使用。TTC溶液若變成紅色則不可再用。

2.顯色時(shí)要使組織切片全部浸入TTC染色液中。

3.本品具有微量的光和熱敏感性，使用以及存放的過程中避免長(zhǎng)時(shí)間曝光或者接觸到過高溫

4.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。