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乙酰輔酶A羧化酶試劑盒檢測原理

發(fā)布時間:2019/4/26 點(diǎn)擊量:1746

ACC在生物體內(nèi)催化乙酰輔酶A羧化生成丙二酰輔酶A,是脂肪酸和許多次生代謝產(chǎn)物合成
的關(guān)鍵酶。ACC的活性在一定程度上決定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。

 

測定原理
ACC 能夠催化乙酰輔酶 A、NaHCO3和 ATP 生成丙二酰輔酶 A、ATP 和無機(jī)磷,通過鉬酸
銨定磷法測定無機(jī)磷的增加量來測定 ACC 活性。 

 

樣本的前處理
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提
取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,
加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

 

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