通用RT-PCR 試劑盒(M-MLV)

規(guī)格：25T/50T/100T

保存：-20℃保存，避免反復(fù)凍融，復(fù)檢期為1 年。

說(shuō)明書(shū)1 份1 份1 份

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒適用于各種RNA 制品的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)以及隨后的PCR 擴(kuò)增。它采用M-MLV 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，能夠
獲得較長(zhǎng)的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。同時(shí)，在20ul 反轉(zhuǎn)錄體系和50ul PCR 反應(yīng)體系中，還可以一次性得到足夠量的PCR 產(chǎn)物用于后續(xù)的克隆實(shí)驗(yàn)。本試劑盒中配置的酶均為進(jìn)口的酶。RT 酶采用進(jìn)口的M-MLV，所以cDNA 更長(zhǎng)，基因的信息保留得更完整！
反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中特異的RNase 抑制劑可有效降低由于外源RNase 污染而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的風(fēng)險(xiǎn)。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于cDNA 克隆及目的基因檢測(cè)等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

操作步驟：
一、反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

1、在冰浴的無(wú)RNase 的離心管中加入如下反應(yīng)成分：
1-5ug 總RNA 或50-500ng mRNA
2ul Oligo(dT)16 或2 pmole 基因特異性引物
補(bǔ)RNase-free ddH2O 至14.5ul

2、70℃保溫5min 后迅速在冰上冷卻2min，簡(jiǎn)短離心收集反應(yīng)液后加入以下各組分：
4ul 5×M-MLV Buffer
1ul dNTPs
0.5ul RNasin
1ul M-MLV

3、42℃溫浴60min，如果是用隨機(jī)引物，請(qǐng)先將離心管置25℃溫浴10min，再42℃溫浴60min。

4、95℃加熱5min 終止反應(yīng)，置冰上進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或-20℃保存。

5、用RNase-free ddH2O 將反應(yīng)體系稀釋到50ul，取2-5ul 進(jìn)行PCR 反應(yīng)。

二、PCR 反應(yīng)

1、按以下各組分配制50ul PCR 反應(yīng)體系：
10×PCR Buffer 5ul
dNTPs 1ul
上游引物（用戶自備10um） 1ul
下游引物（用戶自備10um） 1ul
RT 反應(yīng)產(chǎn)物2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH2O x ul
Total Volume 50ul

2、混勻后短暫離心，PCR 儀擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。

注意事項(xiàng)：

1、用于cDNA 合成反應(yīng)的相關(guān)試劑和耗材盡可能用DEPC 進(jìn)行處理，并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓
滅菌時(shí)，首先用經(jīng)過(guò)滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進(jìn)行過(guò)濾除菌處理。

2、試劑盒的各組分應(yīng)在-20℃保存，避免反復(fù)凍融，有效期12 個(gè)月。

3、RNA 樣品要避免反復(fù)多次凍融，應(yīng)使RNA 在冰浴中處于融化狀態(tài)。