產(chǎn)品列表 / products
測定意義:
糖原是由葡萄糖單位構(gòu)成的高分子多糖,是糖的主要的儲存形式之一,主要貯存在肝和肌肉
中作為備用能量,分別稱為肝糖原和肌糖原。肝糖原可調(diào)節(jié)血糖濃度,當(dāng)血糖升高時(shí)可在肝
臟合成糖原,血糖降低時(shí),肝糖原則分解為葡萄糖以補(bǔ)充血糖。因此,肝糖原對維持血糖的
相對平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的儲存形式,在劇烈運(yùn)動消耗大量血糖時(shí),肌糖原不
能直接分解成血糖,必須先分解產(chǎn)生乳酸,隨血液循環(huán)到肝臟,通過糖異生轉(zhuǎn)變?yōu)楦翁窃蚱?br />萄糖。
測定原理:
蒽酮法。利用強(qiáng)堿性提取液提取糖原,在強(qiáng)酸性條件下利用蒽酮顯色劑測定糖原含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、濃硫酸(不允許快遞)和蒸
餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體50mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:0.1mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 10mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶, 4℃保存;
糖原提?。?br />1﹑細(xì)胞或細(xì)菌:收集500~1000 萬細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;加入0.75mL 提
取液超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30 次);轉(zhuǎn)移至
10mL 試管中,95℃水浴20min(蓋緊,防止水分散失),隔5min 振搖試管1 次,使充分混
勻;取出試管冷卻后,用蒸餾水定容到5ml,混勻,8000g 25℃離心10min,取上清液待測。
2﹑組織:稱取0.1~0.2g 樣品,加入0.75ml 提取液充分勻漿;轉(zhuǎn)移至10ml 試管中;95℃水
浴20min(蓋緊,防止水分散失),隔5min 振搖試管1 次,使充分混勻;待組織全部溶解后,
取出試管冷卻后,用蒸餾水定容到5ml,混勻,8000g 25℃離心10min,取上清液待測。
步驟和加樣表
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長至620nm,蒸餾水調(diào)零。
2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95℃。
3、試劑二工作液的配制:在試劑二中倒入10mL 蒸餾水,緩慢倒入40mL 濃硫酸,充分溶
解混勻后使用;用不完的試劑4℃保存一周;
4、加樣表(在EP 管中反應(yīng)):
試劑(μL) 空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 測定管
糖原提取液 250
試劑一 250
蒸餾水 250
試劑二 1000 1000 1000
混勻,95℃水浴10min(蓋緊,防止水分散失),冷卻,于620nm 波長處,以蒸餾水調(diào)零,
分別讀取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管吸光度,分別記為A1、A2 和A3。