人白細(xì)胞介素8(IL-8)elisa試劑盒關(guān)于標(biāo)本的采集和保存

1、細(xì)胞來源：il-8主要由單核－巨噬細(xì)胞產(chǎn)生；其他如成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞等亦可在適宜的刺激條件下產(chǎn)生il-8。

il-8的分子量約8kd，主要活性形式為72個(gè)氨基酸。il-8的氨基酸順序與許多炎癥因子有較高的同源性，屬于同一個(gè)家族；現(xiàn)初步證實(shí)il-8家族（亦稱pf4家族）至少有12個(gè)成員。il-8可以分成α和β亞群，α亞群的基因位于第4號(hào)染色體上，β亞群的基因位于第17號(hào)染色體上。il-8的受體也有兩型：一種只能與il-8結(jié)合，而另一種還能結(jié)合其它的趨化因子；中性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面均表達(dá)豐富的il-8受體。

2、主要生物學(xué)活性：吸引和激活中性粒細(xì)胞，曾被命名為中性粒細(xì)胞激活肽（naf）、粒細(xì)胞趨化肽（gcp）、中性粒細(xì)胞激活因子（naf）等。中性粒細(xì)胞與il-8接觸后發(fā)生形態(tài)變化，定向游走到反應(yīng)部位并釋放一系列活性產(chǎn)物；這些作用可導(dǎo)致機(jī)體局部的炎癥反應(yīng)，達(dá)到殺菌和細(xì)胞損傷的目的。此外il-8對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞也有一定作用。

標(biāo)本的采集和保存

ELISA試驗(yàn)所用標(biāo)本主要為血清，也可以用經(jīng)過預(yù)處理的唾液、尿液、糞便等生物材料?；颊邩?biāo)本可能含有干擾試驗(yàn)的免疫物質(zhì)，導(dǎo)致假陽性或者假陰性的結(jié)果，干擾因素一般可分為兩類，即內(nèi)源性和外源性干擾因素。內(nèi)源性干擾因素包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異性免疫球蛋白等，避免內(nèi)源性干擾因素主要通過選擇合理的試劑。外源性干擾因素包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、儲(chǔ)存時(shí)間過長及標(biāo)本凝固等。在血液采集和運(yùn)輸過程時(shí)，應(yīng)注意避免溶血。否則，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出血紅蛋白，血紅蛋白中的亞鐵血紅素具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA試驗(yàn)測定中，可能會(huì)增加非特異性顯色而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。血清標(biāo)本適宜在新鮮時(shí)檢測，若推遲檢測需將標(biāo)本低溫保存。一般說來，在7天內(nèi)檢測的血清標(biāo)本，可放置于2℃~8℃保存，超過1周檢測的需低溫冰存。因反復(fù)冰融會(huì)使抗體效價(jià)降低，所以，對(duì)需要保存做多次抗體測定的血清標(biāo)本，應(yīng)少量分裝并冰存。血清標(biāo)本應(yīng)充分離心，否則可因殘留的纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結(jié)果。

加樣操作中，依次有3次加樣，即加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物。加標(biāo)本一般采用手工加樣或者加樣器。手工加樣每次必須更換吸嘴，以避免交叉感染。要掌握好并在實(shí)際操作中揣摩使用技巧，避免吸樣量過多或過少。加樣器在長時(shí)間使用時(shí)會(huì)因機(jī)械磨損或推動(dòng)桿內(nèi)附著的血痂等原因造成加樣不準(zhǔn)，因此必須定期對(duì)加樣器進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)。加酶結(jié)合物和底物一般可直接滴加。每次加樣時(shí)，應(yīng)將所加物置于ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，注意不可濺出，不能產(chǎn)生氣泡，加酶試劑后要用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板上輕輕擦拭吸干。加底物操作時(shí)應(yīng)注意各試劑盒顯色劑不能混用，添加順序不能顛倒，不能濺出孔外。標(biāo)本較多時(shí)，需要分批操作，以免加樣板過多，造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(尤其是在室溫較高時(shí))。最后，在微型振蕩器上震蕩lmin，以保證混勻。

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